人脂肪干細(xì)胞永生化
根據(jù)不同來(lái)源及分化階段，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞具有分化為多種不同組織的能力，但在倫理上存在爭(zhēng)議。成體干細(xì)胞因其來(lái)源廣泛、增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)，現(xiàn)已成為組織工程學(xué)研究的選種子細(xì)胞。其中，脂肪干細(xì)胞作為組織工程修復(fù)的種子細(xì)胞，因其具有來(lái)源豐富、取材容易、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，正受到越來(lái)越多的關(guān)注。脂肪干細(xì)胞形態(tài)類(lèi)似成纖維細(xì)胞，具有較強(qiáng)的增殖能力。在一定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，具有多向分化潛能。
1) 組織來(lái)源于人的正常脂肪組織。
2) 細(xì)胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性，CD45免疫熒光染色為陰性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
英文名稱(chēng) | 人脂肪干細(xì)胞永生化 | 規(guī)格 | 1×106cells |
種屬 | 人 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁培養(yǎng) |
細(xì)胞形態(tài) | 長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞， | 貨號(hào) | E-XB6567 |
用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 貨期 | 現(xiàn)貨 |
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否*揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。.觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。
9. 注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。
1)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml*培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠骨細(xì)胞 | 兔韌帶成纖維細(xì)胞 |
豬腎小管上皮細(xì)胞 | 人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞 |
豬胸腺成纖維細(xì)胞 | 羊皮膚成纖維細(xì)胞 |
豬睪丸支持細(xì)胞 | 人皮膚成纖維細(xì)胞 |
豬腎小球系膜細(xì)胞 | 小鼠室管膜細(xì)胞 |
豬膀胱上皮細(xì)胞 | 大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞 |
豬膀胱平滑肌細(xì)胞 | 小鼠腸巨噬細(xì)胞 |
豬卵巢內(nèi)膜細(xì)胞 | 兔晶狀體上皮細(xì)胞 |
豬子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 | 兔鞏膜成纖維細(xì)胞 |
豬甲狀腺上皮細(xì)胞 | 小鼠胰腺腺泡細(xì)胞 |
豬垂體細(xì)胞 | 大鼠肝外膽管上皮細(xì)胞 |
豬胸腺基質(zhì)細(xì)胞 | 小鼠食管上皮細(xì)胞 |
豬腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞 | 人脂肪干細(xì)胞永生化人附睪管上皮細(xì)胞 |
豬胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞 | 兔腹腔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 |
豬胰腺腺泡上皮細(xì)胞 | 大鼠肝kupffer細(xì)胞 |
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